Святий апостол Тимофій походив із Лікаонського міста Лістри у Малій Азії. Він був звернений до Христа у 52 році святим апостолом Павлом.
Коли апостоли Павло і Варнава вперше відвідали Лікаонські міста, апостол Павло в Лістрі зцілив кульгавого від народження, і багато жителів міста повірили в Христа, серед них був і майбутній апостол, юнак Тимофій, його мати Євніка та баба Лоїда.
Насіння віри, посіяне апостолом Павлом у душі святого Тимофія, принесло рясні плоди. Тимофій став ревним учнем апостола, а згодом — його невідлучним супутником та співробітником у проповіді Євангелія. Апостол Павло любив святого Тимофія і називав його в Посланнях своїм коханим сином, з вдячністю згадуючи його вірність та відданість. Він писав Тимофію: «Ти пішов мені у вченні, житії, розташуванні, вірі, великодушності, любові, терпінні, у гоніннях, стражданнях...».
У 65 році апостол Павло висвятив апостола Тимофія на єпископа Ефеської Церкви, якою святий Тимофій керував 15 років. Святий апостол Павло, перебуваючи в Римі в темниці і знаючи, що його чекає мученицький подвиг, викликав до себе вірного учня та друга апостола Тимофія на останнє побачення.
Святий Тимофій закінчив життя мученицько. У Ефесі язичники звершували свято на честь ідолів і носили їх містом, супроводжуючи безбожними обрядами та піснями. Святий єпископ Тимофій, ревнуючи про Славу Божу, намагався зупиняти і навчити засліплених ідолопоклонством людей, проповідуючи їм справжню віру в Христа.
Язичники в озлобленні кинулися на святого апостола, били його, тягли землею і побили камінням. Мученицьку смерть за Христа святий апостол Тимофій сприйняв у 80 році. У 4 столітті святі мощі апостола Тимофія були перенесені до Царгорода і покладені у храмі Святих Апостолів. Церква вшановує святого Тимофія серед сімдесяти апостолів.