Преподобний Іов Почаєвський народився в середині 16 століття в Галичині від благочестивих батьків на прізвисько Залізо і був названий у хрещенні Іоанном. Він жив у важкі для Росії роки, коли на західних її околицях православний народ Волині та Галичини зазнавав церковних та політичних утисків з боку польсько-литовських магнатів.
У десятирічному віці хлопчик залишив батьківську хату та просив ігумена найближчого Угорницького монастиря дозволити йому служити в обителі. Своєю старанністю він завоював любов монастирського братства, прозорливий ігумен провидів у ньому великі духовні дари. На дванадцятому році життя Іоанн прийняв чернечий постриг з ім'ям Іов, а на тринадцятому — вже після багатьох чернечих подвигів — був висвячений на сан священика (згодом він прийняв схиму).
Звістки про духовні подвиги Йова широко поширилися по всьому краю. До преподобного почали приходити вельможі, які просили духовного опікування. Він став користуватися особливою довірою та заступництвом відомого захисника православ'я на Волині князя Костянтина Острозького. Князь звернувся до ігумена з проханням відпустити преподобного Іова до його княжого Дубенського Хресного монастиря. Ігумен погодився, і через деякий час преподобний Йов був поставлений на чолі Дубенської братії.
Особливо важливою для зміцнення православ'я на Волині була книговидавнича та літературна діяльність преподобного Іова. Довгі роки (до 1932 року) у Почаївському монастирі зберігалася праця найпреподобнішого — «Книга блаженного Іова Почаєвського, владною рукою його написана», що містить до 80 бесід, повчань, проповідей, а також виписки зі святоотцівських аскетичних та полемічних творів.
Преподобний Йов ігуменував до 1649 року. Наступника собі він призначив майже у столітньому віці — на момент передачі сану преподобному було 98 років. Але й після цього Йов брав участь у найважливіших справах обителі. 2 листопада 1651 року святий отримав одкровення про свою близьку кончину і незабаром мирно відійшов у інший світ.
Преподобний Йов був похований біля печери, де трудився. Над його могилою часто бачили чудове сяйво. Через сім років після смерті святий Іов тричі з'явився уві сні митрополиту Київському Діонісію (Балабану) з звісткою про те, що настав час відкривати його святі мощі. Нетлінні мощі преподобного Іова були перенесені до храму Живоначальної Трійці, де поруч із ними сталося багато чудес.
Чудові зцілення від мощів преподобного Іова спонукали Святіший Синод вдруге відкрити їх, що було здійснено 10 вересня 1833 року. Ця дата зараз вважається православним святом.